Эпизоотологические особенности и диагностика инфекционной анемии цыплят

В статье описаны эпизоотологические особенности течения инфекционной анемии цыплят (далее – ИАЦ) в промышленном птицеводческом предприятии мясного направления, ее влияние на продуктивность цыплят, качество мясной продукции и эффективность проведения специфической профилактики. Также представлены результаты лабораторных исследований (серологических, гематологических, вирусологических, молекулярно-биологических, электронно-микроскопических и др.) по выделению и идентификации вируса инфекционной анемии цыплят.

 

Содержание

1. Введение

2. Материалы и методы

3. Результаты и обсуждения

4. Заключение

5. Рекомендации НПК Фарминдустрия

6. Литература

ВВЕДЕНИЕ

Инфекционная анемия цыплят - иммуносупрессивная болезнь, которая характеризуется отставанием в росте и развитии, апластической анемией, дерматитами, повышенной восприимчивостью к возбудителям других инфекций (вирусных, бактериальных, паразитарных), а также снижением эффективности вакцинаций против ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного бронхита кур (ИБК), инфекционной бурсальной болезни (ИББ), болезни Марека и др. [1,2,3,4,8,9]. Болезнь впервые описана в 1979 году [10]. Инфекционная анемия цыплят широко распространена в странах с развитым промышленным птицеводством [1,2,3,4,8,9]. 

 

Экономический ущерб от ИАЦ складывается из потерь от падежа птицы (в том числе при возникновении секундарных инфекций), снижения продуктивности, повышения конверсии корма, снижения качества мясной продукции, а также затрат на антибактериальные и витаминные препараты. В 1999 году вирус ИАЦ был выделен в отдельный род Gyrovirus [6].

 

В 2015 году на сессии ICTV вирус ИАЦ был отнесен к семейству Anelloviridae [5]. Величина вируса, по результатам исследований разных ученых, составляет от 18 до 26,5 нм [1,2,3,4,8,9]. Традиционно считалось, что вирус ИАЦ инфицирует только кур, однако в настоящее время варианты вируса выделены от домашних воробьев, индеек, японских перепелов, мышей, кошек, собак и человека [7].

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектом исследований являлись цыплята-бройлеры кросса «РОСС-308». При проведении исследований использовали клинический и патологоанатомический методы исследований, а также такие лабораторные методы как: гематологический, серологический, вирусологический, молекулярно-биологический, электронно-микроскопический, постановку биопробы.

 

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Впервые клинические и патологоанатомические признаки инфекционной анемии цыплят в хозяйстве были отмечены в 2008 году на цыплятах, завезенных из Нидерландов компанией «Хаанстра», после ввоза инкубационного яйца из Испании компании «Мигель Авикола», полученного от не вакцинированного против инфекционной анемии цыплят родительского поголовья.

 

В период проведения исследований проводили наблюдение за партиями цыплят-бройлеров, полученных от разных поставщиков. Первоначально проявление клинических признаков отмечалось в 14-29-суточном возрасте. Больные цыплята были малоподвижны, плохо поедали корм. Отмечались взъерошенность оперения, отставание в росте и развитии, бледность гребешка, видимых слизистых оболочек, кожных покровов, дерматиты в области крыльев и брюшной стенки. Характерный признак – резкое расслоение цыплят в течение 2-3-суток. На партиях, неблагополучных по ИАЦ, было установлено снижение прироста живой массы

 

Средний живой вес 1 головы цыплят неблагополучных по ИАЦ партий при убое составил 1779,5 г. Средний живой вес 1 головы цыплят благополучных по ИАЦ партий при убое составил 2178,3 г, что выше среднего живого веса 1 головы при убое цыплят неблагополучных по ИАЦ партий на 398,8 г. Средний среднесуточный привес цыплят неблагополучных по ИАЦ партий составлял 48,4 г. Среднесуточный привес цыплят благополучных по ИАЦ партий был выше на 10,5 г и составлял 58,9 г. Средняя сохранность цыплят неблагополучных по ИАЦ партий составила 89,5%. а цыплят благополучных по ИАЦ партий была выше на 7,7% и составляла 97,2 %.

 

В 2011-2014гг. повышение падежа цыплят-бройлеров с признаками ИАЦ отмечалось в возрасте 17-29 суток, т.е. наблюдался один пик смертности. В 2015-2016гг. динамика падежа цыплят-бройлеров изменилась, а именно стали выявлять 2 пика смертности – в возрасте 14-21 сутки и в возрасте 26-36 суток. Первый пик смертности был обусловлен трансовариальной передачей вируса ИАЦ, второй – горизонтальной. Динамика падежа цыплят-бройлеров в благополучных по ИАЦ корпусах характеризовалась низким уровнем смертности на протяжении всего периода выращивания.

 

При патологоанатомическом вскрытии наиболее часто выявляли диффузные кровоизлияния в области крыльев, гангренозные дерматиты в области крыльев, так называемый синдром «синего крыла», а также наличие подкожных инфильтратов в области брюшной стенки и нижних конечностей, цвет которых варьировал от соломенно-желтого до буро-зеленоватого (рис. 2), некроз кожи пальцев.

 

 

Кроме этого, отмечались такие патологоанатомические признаки как атрофия тимуса, изменение цвета костного мозга, гиперемия бурсы и наличие в ней серозно-слизистого экссудата молочно-белого цвета, гипертрофия печени и почек, синдром «круглое сердце», штрихоподобные кровоизлияния в мышцах бедра и голени. У некоторых цыплят наблюдалось скопление в брюшной полости студневидного инфильтрата соломенно-желтого цвета, диффузные кровоизлияния в слизистой оболочке железистого желудка.

 

У цыплят 3-5-суточного возраста иногда выявляли геморрагии в фабрициевой сумке, а также обнаруживали наличие серозно-слизистого экссудата молочно-белого цвета в бурсе, патологические изменения (обесцвечивание или нарушение структуры) костного мозга.

 

 

 

При осмотре тушек цыплят-бройлеров были выявлены следующие причины выбраковки тушек в убойном цехе: венозная гиперемия кожи в области крыльев («синее крыло»), серозные и серозно-геморрагические отеки и кровоизлияния в подкожной клетчатке в области грудины, брюшной стенки, крыльев и нижних конечностей, наличие на мышцах наружных перимизий. Выявленные дефекты мясной продукции представлены на рисунке 3. Тушки с вышеперечисленными дефектами выбраковывали и направляли в промышленную переработку. При выявлении случаев, имеющих признаки осложнения условно-патогенной микрофлорой, тушки направляли на утилизацию.

 

 

Образцы пораженных фабрициевых сумок и костного мозга были отобраны от цыплят-бройлеров 22-суточного возраста для проведения молекулярно-биологических исследований методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР). В результате проведенных исследований в образцах был выявлен генетический материал вируса ИАЦ. В результате сравнительного анализа полученных нуклеотидных последовательностей фрагментов гена VP1 с другими штаммами и изолятами вируса ИАЦ из базы данных PubMed было установлено, что последовательность фрагмента гена VP1 образца изолята вируса, выделенного от цыплят-бройлеров, имеет гомологию 89% с изолятом CN_BR-37 и штаммами JS-China 78, AN-China 32 (GeneBank).

 

В 2016 году выделенный от цыплят-бройлеров 22-суточного возраста изолят вируса ИАЦ был депонирован в Государственную коллекцию вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «ФНИЦЭМ им Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России как патогенный штамм «МЕ-77», семейство Circoviridae, род Gyrovirus под регистрационным номером 2837. В 2018 году был получен патент на изобретение № 2646116 от 30.12.2016г./01.03.2018г. «Штамм вируса инфекционной анемии цыплят «МЕ-77» для производства инактивированных сорбированных и эмульгированных вакцин и диагностикумов».

 

Исследование сывороток крови цыплят-бройлеров на наличие антител к вирусу ИАЦ проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА). Всего было исследовано 2461 проба сывороток крови от цыплят-бройлеров разного возраста. В возрасте 28-38 суток выявляли единичные положительные пробы сыворотки крови с титром антител от 1:1050 до 1:4870 (BioChek). Наличие антител в сыворотке крови цыплят в условиях отсутствия вакцинации против ИАЦ свидетельствует о циркуляции полевого вируса на поголовье птицы. Отсутствие антител у цыплят в возрасте 36-38 суток можно объяснить тем, что при горизонтальной передаче вируса, когда инфицирование происходит в возрасте 3-6 недель, антитела не успевают вырабатываться. Активные антитела в сыворотке крови можно обнаружить в возрасте между 5 и 9 неделями, если передержать часть цыплят после убоя партии в течение 2-3 недель. Кроме этого, отсутствие антител у переболевшей птицы может быть связано с феноменом иммунологической толерантности. Чтобы установить уровень титров антител после переболевания, было отобрано 50 условно больных цыплят с целью их передержки в течение 14 дней. Через 14 дней от цыплят были отобраны пробы сыворотки крови для исследования в ИФА на наличие антител к вирусу ИАЦ. В результате исследований было установлено, что уровень антител к вирусу ИАЦ в сыворотках крови переболевших цыплят составил от 1:2372 до 1: 8109.

 

В процессе проведения серологических исследований было также установлено, что у цыплят неблагополучных по ИАЦ партий имеет место значительное снижение иммунного ответа на введение вакцин против НБ, ИБК, ИББ. Количество иммунных к вирусу НБ цыплят-бройлеров из благополучных по ИАЦ птичников составило от 82 до 86%. Количество иммунных к вирусу НБ цыплят-бройлеров из неблагополучных по ИАЦ птичников составило от 28 до 68%. Средние значения титров антител к вирусу ИББ в сыворотках крови цыплят из неблагополучных птичников было ниже средних значений титров антител в сыворотках крови цыплят из благополучных птичников в среднем в 3,7 раза. Средние значения титров антител к вирусу ИБК в сыворотках крови цыплят из неблагополучных птичников было ниже средних значений титров антител в сыворотках крови цыплят из благополучных птичников в среднем в 2,9 раза.

 

Для проведения гематологического исследования были отобраны пробы крови от цыплят-бройлеров 19-21-суточного возраста с клиническими признаками ИАЦ в период пика смертности. Также были отобраны пробы крови от цыплят, не имеющих выраженных клинических признаков ИАЦ. Уровень гематокрита в пробах крови, полученных от цыплят с признаками ИАЦ был на 4,0-8,6% ниже диагностического уровня (27%) и на 29,5-50,9% ниже, чем уровень гематокрита в пробах, полученных от цыплят без признаков ИАЦ. Также по результатам исследований в пробах крови, полученных от цыплят с признаками ИАЦ, отмечались лейкопения и тромбоцитопения.

 

При проведении вирусологических исследований путем заражения куриных эмбрионов в желточный мешок суспензией, приготовленной из печени клинически больных цыплят в дозе 0,2 см³, не было выявлено каких-либо видимых поражений эмбрионов. Однако при исследовали в ПЦР в образцах тканей эмбрионов и ХАО был выявлен вирус ИАЦ. Часть инфицированных эмбрионов были проинкубированы для получения цыплят. Всего было выведено 12 голов цыплят. На 7-е сутки 5 цыплят были убиты с диагностической целью. При патологоанатомическом вскрытии были выявлены анемия кожных покровов, слизистых оболочек, почек, печени, селезенки, наличие серозно-слизистого экссудата в бурсе, обесцвечивание костного мозга. На 10-11 сутки погибли оставшиеся 7 цыплят с признаками депрессии. При патологоанатомическом вскрытии у павших цыплят были выявлены признаки анемии кожных покровов и внутренних органов, наличие серозно-слизистого экссудата в бурсе, выраженная атрофия тимуса, атрофия и изменение окраски костного мозга на светло-серый или бело-желтый, кровоизлияния в мышцах бедра и голени.

 

В результате электронно-микроскопического исследования с использованием метода негативного контрастирования в образце вируссодержащего материала (ВСМ) были обнаружены вирусные частицы диаметром 20-25 нм икосаэдрической формы, которые по морфологическим характеристикам были идентичны представителям рода Gyrovirus.

 

Для постановки биопробы использовали беспородных СПФ-цыплят суточного возраста, так как цыплята раннего возраста наиболее восприимчивы к вирусу ИАЦ. В опытной и контрольной группах было по 25 цыплят. Цыплят содержали в клеточных батареях в виварии. Каждую группу цыплят содержали в отдельном боксе. Цыплятам опытной группы инокулировали вируссодержащую суспензию, приготовленную из печени клинически больных цыплят-бройлеров, внутрибрюшинно в объеме 0,2 см³. Цыплятам контрольной группы ВСМ не вводили. Через сутки после инокуляции убивали по 5 цыплят с целью отбора проб крови. Кровь на наличие вируса ИАЦ исследовали в ПЦР. В результате исследования было установлено наличие вируса ИАЦ в крови цыплят опытной группы через 24 часа после инокуляции ВСМ. На 10-12 сутки у цыплят опытной группы наблюдались потеря аппетита, депрессия (малоподвижность, сонливость), бледность кожных покровов и видимых слизистых оболочек, отставание в росте и живой массе по сравнению с цыплятами контрольной группы.

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

 

 

В результате проведенных исследований был выделен и идентифицирован возбудитель ИАЦ у цыплят-бройлеров в промышленном птицеводческом предприятии мясного направления. Было установлено иммунодепрессивное влияние вируса ИАЦ на иммунную систему цыплят, что выражалось в снижении эффективности проведения специфической профилактики против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и инфекционной бурсальной болезни. Течение ИАЦ сопровождалось снижением показателей продуктивности и качества мясной продукции, что наносило значительный экономический ущерб предприятию.

 

РЕКОМЕНДАЦИИ НПК ФАРМИНДУСТРИЯ

 

Для профилактики инфекционной анемии птиц рекомендуем использовать следующие вакцины
Nobilis® CAV P4 из штамма «26Р4» («Intervet International B.V.», Нидерланды), AviPro THYMOVAC из штамма «Cux-1», («Lohmann Animal Health GmbH & Co. KG», Германия)
Для симптоматического лечения и профилактики анемии рекомендуем: Витамин К протект

Витамин К протект улучшает процессы метаболизма и предотвращает дефицит витамина  К и некоторых экзогенных аминокислот. Изначально Витамин К влияет на процесс свертываемости крови путем участия в синтезе факторов свертываемости. Витамин К также участвует в метаболизме коллагена в костях путем модификации протеина отвечающего за реадсорбцию ионов кальция в почках. Аминокислоты влияют на метаболизм протеинов в организме.

 

Применяется в птицеводстве для обогащения рациона домашней птицы витамин К и составляющие кармовую добавку аминокислоты.

 

Препарат Витамин К протект может быть использован при первичном или вторичном дефиците витамина К. в качестве вспомогательного препарата при заболеваниях вызывающих поражение печени, кишечный энтерит, для предотвращения геморрагического диатеза, при бактериальных, вирусных или паразитических заболеваниях, вызывающих поражение кровяных сосудов и после лечения антибиотиками и сульфаниламидами.

 

ЛИТЕРАТУРА

 

1.Алиев, А.С. Инфекционная анемия цыплят / А.С. Алиев, И.Н. Громов, М.В. Бурлаков и др. – СПб.: Изд. ФГОУ ВПО «СПбГАВМ», 2013. – 52 с.

2.Гусева, Е.В. Инфекционная анемия цыплят: Обзор литературы / Е.В. Гусева, Т.А. Сатина, Т.А. Фомина. – Владимир: ОК НИИ и МС ВНИИЗЖ, 1997. – 72 с.

3.Дмитриева, М.Е. Инфекционная анемия цыплят. Диагностика и профилактика / М.Е. Дмитриева, Э.Д. Джавадов, Е.С. Людькова. – СПб.: РК «Агат», 2011. – 40 с.

4.Инфекционная патология животных: В 2 т. / Под ред. А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина. – М.: Академкнига, 2006. – Т.1. – 1911 с.

5.Breitbart M. Move genus Gyrovirus from the family Circiviridae to the family Anelloviridae. ICTV Taxonomy History for Chicken anemia virus, London UK, 2015.

6.Pringle C.R. Virus taxonomy at the ΧIth International Congress of Virology, Sydney, Australia. Arch. Virol., 1999, 144: 2065-2070.

7.Sandhya N. Chicken anemia virus an economically important poultry virus / N. Sandhya, D.V.R. Sai Gopal // Int. J. Rec. Sci. Res. – 2019. – V. 10. – P. 32065-32070.

8.Schat K.A., van Santen V.L. Chicken infectious anemia. In: Disease of Poultry, 13^th edition / D.E. Swayne, J.R. Glisson, L.R. McDougald, L.K. Nolan, D.L. Suarez, V. Nair (ads.). John Wiley&Sons, Inc., 2013: 248-264.

9.Todd D. Circoviruses: immunosuppressive threats to avian species: a review / D. Todd // Avian Pathol. – 2000. – V. 29. – P. 373-394.

10. Yuasa N., Taniguchi T., Yoshida I. Isolation and some characteristics of an agent inducing anemia in chicks. Avian Dis., 1979, 23: 366-385.

EPISOOTOLOGICAL FEATURES AND DIAGNOSIS OF CHICKEN INFECTIOUS ANEMIA IN BROILER CHICKENS

E.V Balendor

Key words: epizootology, diagnostics, chicken infectious anemia, broiler chickens.

 

The article describes the epizootic features of the course of infectious anemia in chickens (CAV) in an industrial poultry enterprise for meat production, its influence on the productivity of chickens, the quality of meat products and the effectiveness of specific prophylaxis. The results of laboratory studies (serological, hematological, virological, molecular biological, electron microscopic, etc.) on the isolation and identification of the chicken infectious anemia virus are also presented.